车载USB突然不读U盘可能有多种原因。以下是一些常见的故障排查步骤和可能的解决方案：

1. 检查U盘格式：部分车辆可能仅支持特定格式（如FAT32）的U盘。尝试将U盘格式化为FAT32格式，看是否能解决问题。

2. U盘质量问题：尝试更换一个新的U盘，看车载USB是否能够正常读取。如果新U盘能够正常工作，那么可能是原U盘存在问题。

3. USB接口问题：可能车载USB接口存在问题，可以尝试将U盘插入其他USB接口，看是否能够读取。

4. 文件格式或容量问题：确保U盘里的文件类型（如音频、视频等）是车辆能够识别的，并且文件大小不超过车载系统的限制。过大的文件或不受支持的文件格式可能导致车载系统无法读取U盘。

5. 车载系统问题：如果上述方法均无效，可能是车载系统出现故障。可以尝试重启车载系统，或者查阅车辆的使用手册，看是否有关于U盘兼容性的特定说明。

6. 软件更新：如果车辆较新且支持软件更新，查看是否有可用的系统更新。有时候更新车辆的系统软件可以解决一些兼容性问题。

如果以上方法都无法解决问题，建议联系车辆制造商的客户服务部门或前往专业的汽车维修店进行检查和维修。他们在诊断和修复车载USB不读U盘的问题方面可能拥有更多的专业知识和技能。